光路 - 濾片特性 長通濾片 – 允許長于設定波長的光通過 短通濾片 – 允許短于設定波長的光通過 帶通濾片 – 允許一定帶寬的波長通過 光路 - 濾片特性 當以 45o 角放置濾片時,該濾片可以通過一定波長的光,同時也可以阻斷并折射該波長以下的光 這種方式的濾片稱為二向色性濾片( ) 濾片 帶通濾片 BAND PASS (BP) 只允許某些波長的光通過二向色性濾片 一定波長以上通過流式細胞儀分析軟件，該波長以下折射 630 nm Light White Light 620 -640 nm Light / at 45 deg light Light Light - tube (PMT) 將光學信號轉變為電脈沖(數字數據)信號 不同的脈沖信號被轉換成數字通道()的過程 : Count vs MFI Dual Dual 分析系統 以FC500機型的CXP軟件介紹 * * 是全球著名的流式細胞儀生產廠商，機型齊全，從分析到分選，從科研到臨床，充分滿足生命科學領域使用者的需求。
* Data with Q-Prep/Quick Spin: PerCP and APC lower MFI than ECD, PC5, and PE. 流式細胞儀FLOW 原理及軟件介紹 流式細胞儀發展史 1947年 發明了庫爾特原理，用于血細胞分析 1953年推出了世界上第一臺流式細胞分析儀 Model A 1972年推出世界上第一臺激光流式細胞儀EPICS II 1975年研制出世界上第一臺帶計算機的流式細胞儀 1997年推出世界上第一臺單激光四色數字化流式細胞儀EPICS XL/MCL 2000年首先將高精度數字化顏色補償技術ADC（ ）應用于流式平臺，引領流式進入全新的全矩陣補償、全自動補償和脫機補償時代 2003年推出世界上第一臺單激光五色的流式細胞儀FC500/MCL，2005年升級為FC500/MPL 2006年推出世界上第一臺具有EV參數同時進行無成本絕對計數的多功能細胞分析系統 SC，將流式細胞術與庫爾特原理完美結合流式細胞儀分析軟件，2007年推出MPL進樣系統 2007年收購Dako公司的Moflo和Cyan，使公司成為高端流式市場的領導者 2009年，推出世界是第一臺三激光十色的分析型流式細胞儀/ EPICS XL-ADC SC FC500 MoFlo XDP / Cyan ADP FC500硬件 What is flow ? 流式細胞術是單個細胞/顆粒流過檢測裝置過程中，檢測到的物理和/或化學的特性。
, Flow , 3rd 分類 分析型：只能分析用，液流進入廢液筒 分選型：回收目標細胞，用于后續實驗。要求管道絕對無菌。 基本原理 流路（液流系統） 流動室 鞘液 樣本流 單細胞懸液5*105~1*106個/ml 光路（光學系統） 光源 濾片 光電倍增管PMT HV 電路（電路系統） 放大電路HV及GAIN 增益 A/D轉換 分析系統：計算機 流路構造 流 路 單細胞懸液 大多數儀器是在50-300 μm 大小的孔徑中,將細胞懸液注射進入鞘液中 這一過程,成為流體動力學聚焦 FLOW CELL laser beam fluid 光路構造 光 路 光源 檢測信號散射光信號 FS: 前向角散射光 SS: 側向角散射光(90度散射光)熒光信號 熒光染料 光學濾片 光 路 光源 與通過的細胞聚焦在同一點上 激光 空冷 488nm blue, 633nm red, 325nm UV, 514nm green, 空冷/水冷 II 水冷 系列系列 常用激光器及其通道分配表 檢測信號 散射光信號—前向散射光(FS) FS---- (Angel Light) 在激光束正前方的檢測器, 為前向散射光檢測器 FS的強度與細胞或其他顆粒的大小, 形狀及 有關 FS用于檢測細胞或其他粒子的表面屬性 如:大小 FALS Laser 前向散射光 前向散射光 散射光信號 – 側向散射光 SS-Side (Angel Light) 與激光束垂直方向的檢測器為側向檢測器, 也稱為90度散射光檢測器 SS用于檢測細胞內部結構 如:胞漿內顆粒多少, 核質比 FALS 90LS Laser 側向散射光 側向散射光 90 0 200 0 1000 8 15 20 30 40 50 100 200 1000 Side Light Scale 光路-熒光信號 每種熒光染料均有特定的激發波長, 并激發后會有發射波長,流式細胞儀檢測的即是它特定的發射波長. 利用各種不同波長的光學濾片來收集(檢測)這些光學信號 熒光染料的特性 激發波長() 發射波長() 常用熒光染料的特性 熒光染料 激發波長 (nm) 發射波長(nm)用途顏色 免疫熒光綠色 PE(RD1)免疫熒光橙色 免疫熒光橙紅 免疫熒光紅 染色橙紅 755免疫熒光 深紅 670 670 5 Color Laser (488nm)FITC/PE/ECD/PC5/PC7 熒光染料比較(平均熒光強度) Q-Prep / 試劑系統 PerCP < APC < FITC < ECD < PC5 < PE CD8-FITC CD8-PE CD8-ECD CD8-PC5 CD8-PerCP CD8-APC FALS ( FL1,FL2,FL3,FL4,FL5,SS) * * 是全球著名的流式細胞儀生產廠商，機型齊全，從分析到分選，從科研到臨床，充分滿足生命科學領域使用者的需求。 * Data with Q-Prep/Quick Spin: PerCP and APC lower MFI than ECD, PC5, and PE.
