ImageJ（https://imagej.nih.gov/ij/ ）是美國NIH基于Java開發的免費圖像處理軟件。今天的主題是共定位分析，那么什么是共定位（Colocalization）？從物理角度來看，它意味著兩種或多種顏色熒光分子發出的顏色占據圖像中的相同像素。在生物學上，共定位是指兩個或多個不同分子位于細胞中的同一結構。
在數字成像的背景下，它可以被描述為多通道圖像中的兩種或更多熒光染料在空間重疊。共定位對于確定感興趣結構的位置必不可少，當我們發現某一蛋白在細胞中其重要作用時進一步研究其在何處與何分子結合發揮作用顯得尤為重要。話不多說， 應大家要求今天給大家分享使用ImageJ分析熒光共定位。
免疫熒光熒光染料的選擇熒光避免串色，保存為tiff或者共聚焦格式圖片（如.lsm）避免圖像信息丟失。熒光圖像的背景取決于多種條件，包括顯微鏡因素以及熒光染料熒光強度等。為保證結果有可比性，所有圖片應該使用相同的條件拍攝。
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熒光共定位定性表示方法
廣義來說共定位指不同熒光代表的不同蛋白在同一空間位置分布，例如兩個蛋白都定位于軸突或樹突，在ImageJ中可通過Plot Profile工具得到的隨著劃線distance熒光的灰度值來實現。
對于上圖還可以和大家聊聊關于熒光拍攝過曝的問題，我們知道灰度值0是純黑，255是純白。對于上圖rab7-GFP與beclin 1，隨著distance變化有一截圖像是平的
，從縱坐標可以看出大概在255左右，說明此處存在過曝。簡單來說本來灰度有差異的熒光點都變成了飽和的最大值255，也許有些值本來是233也變成了255，差異就不會被顯現出來，因此熒光圖片拍攝不能過曝。如上所述，Plot Profile也可以用來判斷熒光圖片有無過曝。
擴展
蔡司共聚焦Zen2009軟件也可在拍攝圖像后在Profile下劃線來判斷圖像是否過曝：
在ImageJ菜單下Analyze，Plot Profile（快捷鍵Ctrl+K）可以找到Plot Profile工具。
Plot Profile只適用于線（Line）和矩形（Rectangluar）選框，表示線段和矩形選框所經過的范圍內的灰度變化：
對于僅含有紅綠藍三通道RGB格式熒光圖片，可在ImageJ菜單下Image，Color，Split Channels，得到Red，Green，Blue三通道的圖片。含有除紅綠藍三通道以外的RGB格式熒光圖片，無論有多少個通道也只能拆分出紅綠藍三通道，因此需要拍攝的時候保存為多通道圖片。組合通道Image,Color,Merge Channels后可以得到多通道的熒光圖片。
此時再使用使用劃線工具或者矩形工具分別對對應熒光通道進行Plot Profile，分別得到矩形范圍內熒光強度變化，導出數據繪圖即可。
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三維共定位
二維圖片的共定位可能是假的共定位，也許空間位置上毫無關系。例如下圖二維圖片，我們從上往下看會發現紅色與綠色通道完全Merge，看到一個完全黃色的橢圓形，但其在二維圖片拍攝位置兩種熒光實際上相差十萬八千里,從三維位置看就不難發現其沒有共定位：
對于層掃（Z-Stack）熒光圖片，如下圖所示三維共定位是某一位置在三維空間上存在共定位。
方法為打開層掃熒光圖片在ImageJ主菜單上點擊Image，Stacks，Orthogonal views，就可以看見和文獻中相同的正交視圖，即顯示XY,XZ,YZ視圖，XY視圖中的黃色十字可以用鼠標拖動。
擴展
蔡司共聚焦Zen2009軟件也可達到相同效果：
Ortho為顯示正交視圖，從xy，xz，yz來顯示圖片：
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共定位定量分析
文獻中（doi: 10.1038/srep01365）使用共定位分析產生的散點圖表示共定位程度，散點圖越接對角線共定位程度越高。文獻展示這種共定位散點圖的意義是數據可以偽造，但我們一般偽造不出共定位散點圖的分布。
雙尾分叉形狀的共定位散點圖共定位效果差：
共定位定量指標及其意義：
使用工具——Colocalization Finder：
插件下載與安裝：
將下載插件 Colocalization_Finder .jar 放于plugins文件夾重啟軟件在Plugin即可找到Colocalization Finder。
使用方法：
打開待分析圖片：
Image，Color，Split Channels，得到Red，Green，Blue三通道的圖片：
點擊Plugin，找到Colocalization Finder，分析red通道與green通道的共定位情況，點擊OK：
得到共定位散點圖、共定位數據（意義見上表）等：
Pearson’s_Rr系數為0.07980265非常低，而共定位散點圖也不是對角直線甚至存在分叉，幾乎沒有共定位。但值得注意的是其重疊系數Overlap_R卻高達0.9599，提示我們我們肉眼認為的重疊和共定位存在很大的差別，應該以軟件定量計算結果為準。
對于共定位的統計分析，看看文獻中是如何做的：
文獻中統計了共定位Pearson’s系數與重疊系數。如前所述，共定位散點圖結合共定位系數的統計，結果將非常可信。
此外JACoP也可以進行共定位分析，使用方法類似，大家可以根據需要自行學習：
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熒光Ratio
熒光比值計算pH值。兩通道熒光圖片進行比值即可，方法為：
Process下，選擇Image Calculator，Image1 Divide Image2即可：
ImageJ分析熒光共定位今天就這里，希望對大家有所幫助，祝大家實驗順利。
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近期艾利和旗下高端音頻播放器品牌Astell＆Kern推出了新一代的產品——AK240限量版播放器，售價高達 2499 英鎊(約合人民幣 23176 元)。應該是目前這個星球上最貴的音頻播放器產品。
限量版AK240（左），普通版（右）
作為iriver旗下的高端播放器品牌Astell＆Kern，盡管目前只推出了幾款產品，但在高端音頻播放器領域已經小負盛名，其理念是盡可能還原真實現場的音樂live sound。去年2月28日，Astell＆Kern發布了旗艦產品AK240播放器，售價為16888元，而近期推出的限量版售價高達 2499 英鎊(約合人民幣 23176 元)。
普通版 AK240 采用了電鍍鋁機身，限量版則使用了更加堅硬的不銹鋼材質以及碳纖維材質，并附贈一個由著名設計師 Tanniere R my 設計的真皮皮套，同時搭載 3.31 英寸 AMOLED 觸摸屏。
據悉，Astell&Kern 希望通過這款高端音頻播放器在外觀和音質上給用戶帶來更豪華、更頂級的體驗。他們聲稱，跟普通版相比，限量版除了更加堅硬之外，還能很好的消除電子噪音，給用戶提供更加純凈的音質體驗。
普通版AK240
AK240特色：相比之前的產品除了外形有了較大變化，AK240還延續了AK120的雙芯片獨立解碼方案，兩顆硬解碼芯片為Cirrus CS4198，DSD支持120dB、24bit、192kHz的D/A轉換器，可同時解碼左右聲道的音源，實現左右聲道正負極獨立設置。AK240的另一個亮點是加入了高端音響設備才有的平衡輸出設計。
AK240產品規格：除了前面介紹的芯片，其采用的是航空級硬質鋁，3.31英寸的480×800的AMOLED觸控屏，最大支持24bit/192kHz硬解碼，256GB機身存儲+128GB的擴展卡支持（可存儲1000多首MQS音樂），3250mAh電池，185克重，藍牙4.0、Wifi支持，以及3.5mm插孔×3。
點評：AK再一次教國內廠商如何賺土豪的錢——換個殼賣貴將近30%，人傻錢多速來。
Apple Watch最為人詬病的就是18小時的續航時間，作為手表來說確實是非常致命的問題，不過這其中的商機早就被人注意到了，外設廠商 Nomad 動作迅速地推出了適用于 Apple Watch 的首款移動電源。
外觀上這款移動電源就像一塊小糕點，當然與 Apple Watch 十分搭配。根據 Nomad 的介紹，他們開發的這款移動電源支持無線充電，容量為 1800 毫安，可以四次把 Apple Watch 的電量從 0 充到 100%。這款產品只有 80 克，提供三種顏色選擇，其售價為 59 美元，估計在今年 6 月份出貨。
雖然不能在 Apple Watch 上市初期使用上移動電源，但是能夠滿足夏天的使用需求，也算是一種及時了。
點評：以后上街要帶兩個“尿袋”（香港對于移動電源的稱呼）了.......
之前橫評評測過那款金屬鼠標墊的鐳拓，最近新品頻發，先不說鍵盤和鼠標，光是它的老本行鼠標墊新品最近就推出了3款之多，除了布墊HX1、大號鋁墊ATS MAX以外，比較讓人在意的就是今天要介紹的這款發光鼠標墊Cube。
鼠標墊主體與此前發布的熒光鼠標墊類似，為磨砂硬質樹脂材料及顆粒表面，通過一個microusb接口供電進行發光。
發光鼠標墊并非Rantopad首創，以前TT也有過類似的產品，但是發光部分僅限于鼠標墊的邊緣，中央部分依然不透光。那么可能會有人擔心Rantopad這款全透光的發光鼠標墊是否會影響鼠標的定位？這個問題只能留待評測時解答了。
點評：能在鼠標墊這種不起眼的小眾產物上堅持創新，實在很難得。至少打著互聯網旗號營銷的企業好多了。